1. 胶回收试剂盒和PCR回收试剂盒的区别
如果确定PCR产物很纯(没有引物二聚体),完全可以用PCR产物纯化试剂盒。
如果PCR产物不是很纯,或者PCR扩增条带比较小,PCR产物前面又有较多引物二聚体时,用胶回收,其余用PCR产物纯化试剂盒。
pcr纯化试剂盒和胶回收试剂盒的区别:
PCR纯化试剂盒:是直接水溶解的PAC产物就可以回收,回收效率高,但是只适合单一条带需要纯化测序的时候使用。
PCR凝胶试剂盒:是在PCR产物是混合物,有多条杂带的情况下,先跑胶将杂带分离,然后在将所要的条带位置的胶切下回收,后者的回收效率低,但是很纯净。
胶回收试剂盒操作步骤:
配制琼脂糖EB凝胶,电泳以分离DNA片段。任何类型或等级的琼脂糖都可以使用。
电泳足够时间后,在紫外灯下小心地把所需的DNA的片段切下来。并尽量去除多余的凝胶。
称取空离心管的重量,切下带目的片段的凝胶装在1.5ml离心管中并称其重量,求出凝胶块的重量,近似地确定其体积。一般情况下,凝胶的密度为1g/ml,于是凝胶的体积与重量的关系可按下面换算:凝胶薄片的重量为0.2g 则其体积为0.2ml;加入等倍凝胶体积的Binding Buffer,把混合物置于55℃~65℃水浴中温浴7min至凝胶完全融化,其间每隔2-3分钟混匀一次;
转移700μl的DNA-琼脂糖溶液到一个HiBindTM DNA柱子,并把柱子装在一个干净的2ml收集管内,室温下,10,000×g离心1min,弃去液体。
将柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室温下,10,000×g离心 1分钟,去弃滤出液;这一步相当关键,不要忽略此步。
将柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;注:SPW Wash buffer在使用前必须按瓶子标鉴要求用无水乙醇进行稀释。
将柱子重新套回收集管中,重复加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室温下,10,000×g离心1分钟,去弃滤出液;
弃去液体,将空柱子重新套回收集管中,10,000×g离心1min以甩干柱基质残余的液体。
这步可以去除柱子基质上残余的乙醇,不要省略此步―――对得到好的DNA产量是十分重要的。
把柱子装在一个干净的1.5ml离心管上,加入30~50μl洗脱液或灭菌水上柱子膜上,10,000×g离心1分钟,离心管中的溶液就是纯化的DNA产物,保存于-20度。
2. 胶回收产物如何定量,
可以通过飞秒检测方法进行定量分析,指导回收,再生
3. 本人菜鸟 想问核酸电泳完成后为什么要进行切胶回收 要是没有跑出来为什么也要回收
您好!
① 切胶回收的样品一般包括PCR产物和各种酶切产物,回收用于连接进行质粒构建等。
② 电泳没有跑出来,可能是电泳的问题。。。好歹把样品留着吧。。。
网络教育团队【海纳百川团】为您解答。
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4. 关于胶回收的安全问题
不太清楚你用的是什么方法,不过用ph8.0的平衡酚(phenol,
equilibrated
to
ph
8.0)和酚-氯仿反复抽提效果版还是不错的,权一般后续试验,比如pcr或者连接都是可以的。不然可以考虑转膜的办法,可能可以更干净些?传统回收方法还是比较多的,可以参考一下。
5. 胶回收及目的基因与t载体连接反应中为什么要有对照
连接反应中一般要设置阴性对照和阳性对照。设置阴性对照是为了防止载体自连,设置阳性对照是为了防止整个连接反应的体系有问题。
6. 为什么要胶回收,而不直接用剩下的产物测序
要交会说不用,只产生的产物测序胶回收的话可以比较好的学完用这个交,然后不会产生浪费和污染。系统破坏。
7. 为什么要有胶回收
防止污染以及材料浪费 谢谢~^_^
8. 为什么切胶回收
因为想要“纯化目的片段”,不想有里面有各种酶、缓冲体系 及一些非目的片段啊!
9. 凝胶抽提法回收纯化DNA片段的原理是什么
融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。
1.低熔点琼脂糖挖块法:在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后,其凝固点温度降为30度,熔化温度为65度,这一温度低于绝大多数双链DNA的变性温度,利用这类凝胶纯度高熔点低的特点,在水平式琼脂糖凝胶电泳上,使所需的目的DNA片段转移到低熔点琼脂糖凝胶内,经65度水浴5-10分钟,使之溶化,用饱和酚抽提,就可以分离到所需DNA.
2.玻璃棉离心法:利用玻璃棉为支持介质,通过离心,使含有目的基因DNA片段的溶液从凝胶中析出,经离心管底部的小孔流入套管,再用酚纯化、乙醇沉淀,获得所需的目的基因片段。
3.透析袋电泳法:与常规琼脂糖电泳原理相同,将含有目的基因片段的凝胶切下来,装入透析袋中,同时装入电泳缓冲液,再按常规电泳方法电泳,让DNA在透析袋内走出凝胶块,再纯化缓冲液中的DNA片段。
4.DEAE纤维素纸片回收法:将这种纸片插入到琼脂糖凝胶,其位置正好在回收的DNA条带的前方,使DNA向纸片方向泳动并吸附在纸片上,然后把纸片取出再用洗脱液洗脱吸附的DNA