1. 膠回收試劑盒和PCR回收試劑盒的區別
如果確定PCR產物很純(沒有引物二聚體),完全可以用PCR產物純化試劑盒。
如果PCR產物不是很純,或者PCR擴增條帶比較小,PCR產物前面又有較多引物二聚體時,用膠回收,其餘用PCR產物純化試劑盒。
pcr純化試劑盒和膠回收試劑盒的區別:
PCR純化試劑盒:是直接水溶解的PAC產物就可以回收,回收效率高,但是只適合單一條帶需要純化測序的時候使用。
PCR凝膠試劑盒:是在PCR產物是混合物,有多條雜帶的情況下,先跑膠將雜帶分離,然後在將所要的條帶位置的膠切下回收,後者的回收效率低,但是很純凈。
膠回收試劑盒操作步驟:
配製瓊脂糖EB凝膠,電泳以分離DNA片段。任何類型或等級的瓊脂糖都可以使用。
電泳足夠時間後,在紫外燈下小心地把所需的DNA的片段切下來。並盡量去除多餘的凝膠。
稱取空離心管的重量,切下帶目的片段的凝膠裝在1.5ml離心管中並稱其重量,求出凝膠塊的重量,近似地確定其體積。一般情況下,凝膠的密度為1g/ml,於是凝膠的體積與重量的關系可按下面換算:凝膠薄片的重量為0.2g 則其體積為0.2ml;加入等倍凝膠體積的Binding Buffer,把混合物置於55℃~65℃水浴中溫浴7min至凝膠完全融化,其間每隔2-3分鍾混勻一次;
轉移700μl的DNA-瓊脂糖溶液到一個HiBindTM DNA柱子,並把柱子裝在一個干凈的2ml收集管內,室溫下,10,000×g離心1min,棄去液體。
將柱子重新套回收集管中,加300μl Binding Buffer至HiBind DNA 柱子中;室溫下,10,000×g離心 1分鍾,去棄濾出液;這一步相當關鍵,不要忽略此步。
將柱子重新套回收集管中,加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室溫下,10,000×g離心1分鍾,去棄濾出液;註:SPW Wash buffer在使用前必須按瓶子標鑒要求用無水乙醇進行稀釋。
將柱子重新套回收集管中,重復加入700μl SPW Wash buffer至HiBind DNA柱子中,室溫下,10,000×g離心1分鍾,去棄濾出液;
棄去液體,將空柱子重新套回收集管中,10,000×g離心1min以甩干柱基質殘余的液體。
這步可以去除柱子基質上殘余的乙醇,不要省略此步―――對得到好的DNA產量是十分重要的。
把柱子裝在一個干凈的1.5ml離心管上,加入30~50μl洗脫液或滅菌水上柱子膜上,10,000×g離心1分鍾,離心管中的溶液就是純化的DNA產物,保存於-20度。
2. 膠回收產物如何定量,
可以通過飛秒檢測方法進行定量分析,指導回收,再生
3. 本人菜鳥 想問核酸電泳完成後為什麼要進行切膠回收 要是沒有跑出來為什麼也要回收
您好!
① 切膠回收的樣品一般包括PCR產物和各種酶切產物,回收用於連接進行質粒構建等。
② 電泳沒有跑出來,可能是電泳的問題。。。好歹把樣品留著吧。。。
網路教育團隊【海納百川團】為您解答。
感謝您的採納,O(∩_∩)O 如有疑問,歡迎追問。
4. 關於膠回收的安全問題
不太清楚你用的是什麼方法,不過用ph8.0的平衡酚(phenol,
equilibrated
to
ph
8.0)和酚-氯仿反復抽提效果版還是不錯的,權一般後續試驗,比如pcr或者連接都是可以的。不然可以考慮轉膜的辦法,可能可以更干凈些?傳統回收方法還是比較多的,可以參考一下。
5. 膠回收及目的基因與t載體連接反應中為什麼要有對照
連接反應中一般要設置陰性對照和陽性對照。設置陰性對照是為了防止載體自連,設置陽性對照是為了防止整個連接反應的體系有問題。
6. 為什麼要膠回收,而不直接用剩下的產物測序
要交會說不用,只產生的產物測序膠回收的話可以比較好的學完用這個交,然後不會產生浪費和污染。系統破壞。
7. 為什麼要有膠回收
防止污染以及材料浪費 謝謝~^_^
8. 為什麼切膠回收
因為想要「純化目的片段」,不想有裡面有各種酶、緩沖體系 及一些非目的片段啊!
9. 凝膠抽提法回收純化DNA片段的原理是什麼
融膠液,可以使瓊脂糖凝膠完全融化。同時採用了一種新型的離子交換柱,在特定條件下,使DNA能在離心過柱的瞬間,結合到DNA純化柱上,在一定條件下又能將DNA充分洗脫,從而實現DNA的快速純化。
1.低熔點瓊脂糖挖塊法:在瓊脂糖主鏈導入羥乙基修飾後,其凝固點溫度降為30度,熔化溫度為65度,這一溫度低於絕大多數雙鏈DNA的變性溫度,利用這類凝膠純度高熔點低的特點,在水平式瓊脂糖凝膠電泳上,使所需的目的DNA片段轉移到低熔點瓊脂糖凝膠內,經65度水浴5-10分鍾,使之溶化,用飽和酚抽提,就可以分離到所需DNA.
2.玻璃棉離心法:利用玻璃棉為支持介質,通過離心,使含有目的基因DNA片段的溶液從凝膠中析出,經離心管底部的小孔流入套管,再用酚純化、乙醇沉澱,獲得所需的目的基因片段。
3.透析袋電泳法:與常規瓊脂糖電泳原理相同,將含有目的基因片段的凝膠切下來,裝入透析袋中,同時裝入電泳緩沖液,再按常規電泳方法電泳,讓DNA在透析袋內走出凝膠塊,再純化緩沖液中的DNA片段。
4.DEAE纖維素紙片回收法:將這種紙片插入到瓊脂糖凝膠,其位置正好在回收的DNA條帶的前方,使DNA向紙片方向泳動並吸附在紙片上,然後把紙片取出再用洗脫液洗脫吸附的DNA