⑴ 如何提高凝膠回收目的dna的產率
有好幾年沒做實驗了,不過我對1樓的回答有些疑問,現在有能做23000bp這么長的專PCR?似乎我印象中屬PCR要這么長的長度本身就很難能全長擴增吧。
那麼如果我的理解沒錯的話,樓主是不是直接從土壤的細菌里頭直接提取DNA。(呵呵,我也忘了細菌DNA大概多長),跑了一次電泳,然後把目的片斷割下來,再純化,再跑電泳,發現純化之後的片斷比目的片斷小了。
檢測回收率,你可以在DNA溶解液過柱之後,柱子洗脫之前在柱子上加試劑盒溶解液,吹打幾次吸取一些溶液A,同時吸取一些離心下來的溶液B,再將過柱後的洗脫液C,以及未過柱前的溶液D(如果濃度太低,可相應濃縮)肆個溶液再上一次凝膠電泳,一切都將看得明明白白,究竟你在過柱的這個過程中,DNA到底留在了什麼地方。
我相信有這個電泳圖的話,應該可以很容易理解問題所在了。當然問題有可能象1樓所說的那樣,天根的產品不過關(或者是你自己沒有選對),那就換柱子!
⑵ 為什麼要膠回收,而不直接用剩下的產物測序
要交會說不用,只產生的產物測序膠回收的話可以比較好的學完用這個交,然後不會產生浪費和污染。系統破壞。
⑶ PCR產物電泳做膠回收不也得到純化的目的PCR產物純化試劑盒的好處是什麼
PCR產物純化試劑盒去除的是PCR反應體系中的離子、dNTP、引物以及聚合酶,收集其中的DNA片段。這回只適合於幾乎答沒有非特異性條帶的PCR產物的收集。如果你的PCR產物具有非特異性條帶,那麼一定需要使用膠回收試劑盒。
⑷ 膠回收及目的基因與t載體連接反應中為什麼要有對照
連接反應中一般要設置陰性對照和陽性對照。設置陰性對照是為了防止載體自連,設置陽性對照是為了防止整個連接反應的體系有問題。
⑸ DNA膠回收出現非目的帶,是什麼原因
膠回收出現非目的帶,只能是切膠的時候切得太寬了,或者原來在分離膠就沒有跑開。
分離膠濃度不合適,電泳條件不合適都可能導致分離效果不好。
重新跑下分離膠,只要條件合適,分離開了,切得時候仔細點,後面都不會出現問題。
⑹ 本人菜鳥 想問核酸電泳完成後為什麼要進行切膠回收 要是沒有跑出來為什麼也要回收
您好!
① 切膠回收的樣品一般包括PCR產物和各種酶切產物,回收用於連接進行質粒構建等。
② 電泳沒有跑出來,可能是電泳的問題。。。好歹把樣品留著吧。。。
網路教育團隊【海納百川團】為您解答。
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⑺ 為什麼切膠回收
因為想要「純化目的片段」,不想有裡面有各種酶、緩沖體系 及一些非目的片段啊!
⑻ 膠回收異丙醇的目的
異丙醇用於沉澱DNA...
用異丙醇代替無水乙醇能更好地去除多糖的影響
多糖的污染具體表現為有機版溶劑沉澱時權,沉澱很多,但復溶時,大量沉澱不溶,電泳觀察時核酸含量很低
影響不大,可用到0.6-1體積
⑼ 為什麼DNA需要回收
如果你是指的切膠回收,是因為一個DNA樣品中有可能混有多個不同大小的DNA片段,我們需要通過電泳將這些片段分離開,再將含有目的DNA片段的膠切下來回收其中的DNA片段,達到純化的目的。
⑽ 為什麼要有膠回收
防止污染以及材料浪費 謝謝~^_^